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蛋白質(zhì)分析儀的原理
蛋白質(zhì)分析儀
的檢測原理基本上比濁一統(tǒng)天下,差別僅在于結(jié)構(gòu)方式上。可以說,一般生化分析儀也能做(當然結(jié)果差不少)。比濁檢測是很古老的檢測方式,在眾多比色分析法中,比濁法是不具備,光學特異性的,因此應(yīng)用很少。但由于對特殊蛋白的測定要求反應(yīng)特異性很高,需使用抗原抗體反應(yīng)的特異性才能達到要求。而比濁法在酶標技術(shù)產(chǎn)生前是技術(shù)的基本檢測手段,如單擴,雙擴都是通過比濁來定性或半定量檢測的。這了定量,專門為比濁生產(chǎn)的儀器就出現(xiàn)了,即如今特種蛋白分析儀的前身。
比濁法原理:利用光線散射原理,根據(jù)雷利散射公式,在一定條件下,透射光與微粒濃度成正比,散射光與微粒濃度成反比。(只適用于低濁度溶液)
特種蛋白分析儀從結(jié)構(gòu)上主要分為透射比濁和散射比濁。
透射比濁,測定的是透射光和濁度的關(guān)系。結(jié)構(gòu)簡單,設(shè)計容易,但受入射光影響大,靈敏度低。
散射比濁,測定散射光和濁度的關(guān)系。靈敏度較高,但散射光因微粒大小和性質(zhì)不同,可呈非均向散射,即不同的角度散射光的強度是不同的,因此利用散射比濁,不同的角度測定特性不同。大致說來,前散射因受血清中白蛋白,脂蛋白的影響小而常用,但不能排除乳糜的干擾。
影響比濁的因素:1.抗原抗體比例。抗原抗體比例對復合物的數(shù)量和顆粒大小關(guān)系極大,當抗體>抗原時成正相關(guān),當抗體<抗原時成負相關(guān)。2.抗體純度和效價。3.增聚劑。在反應(yīng)中,為增強抗原抗體反應(yīng)常使用增聚劑,如3-4%的聚乙二醇等,利用其破壞抗原抗體的水化層,促進其靠近反應(yīng),但如濃度不適合,高了會影響其它溶質(zhì)或產(chǎn)生非特異性聚集影響結(jié)果。
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